Анализ крови на сифилис

Суть

Иммуногистохимия (иначе ее называют иммуногистохимический анализ) представляет собой исследование, цель которого состоит в обнаружении патогенных клеток в тканевых образцах. Для этой цель используют молекулы, вырабатываемые иммунной системой.

Само название действия тройственное, в него уместились слова, которые сами по себе являются названиями определенных направлений в науке и практике:

• Иммунология;
• Гистология;
• Химия.

Реактивы, которые применяют, насыщены клетками (cellula), структура которых способна антигены к себе притягивать.

Для удобства, наглядности и контроля используют ферменты, начинающиеся проявляться при реакции положительной.

ИГХ – исследование дополнительное с точки зрения диагностики. К нему прибегают в случае отсутствия результатов гистологии, а также для уточнения на уровне молекул характеристик опухоли.

ИГХ имеет практическое применение при:

• Характеристике клеток;
• Анализе внутриклеточных процессов и уникальности синтеза, в клетках происходящего;
• Анализе гормонов и их рецепторов.

Классификация тестов по типу применяемого антигена. Трепонемные и нетрепонемные тесты на сифилис

В современной венерологии для диагностических целей используется более десятка вариантов серологических реакций на сифилис, которые можно подразделить по разным критериям на различные категории. Классификацию проводят по методологии проведения исследований, области применения, скорости, дешевизне, требованиям к лабораторной оснащенности и т.д. 

По типу используемых антигенов, диагностические тесты традиционно разделяют на две группы— нетрепонемные и трепонемные серологические тесты. 

Трепонемные реакции теоретически более специфичны, однако они также дают ложноположительные результаты. Более того, они не позволяют дифференцировать нелеченный и излеченный сифилис. Результаты трепонемных реакций будут положительными в обоих случаях. Нетрепонемные реакции позволяют различать нелеченную или недавно перенесенную и излеченную инфекцию.

При обследовании рекомендуется проводить и трепонемную, и нетрепонемную реакции. Для установки и подтверждения диагноза «сифилис» требуются положительные результаты при проведении тестов обоих типов — трепонемных и нетрепонемных. Поэтому нетрепонемные тесты применяются в комбинации с трепонемными тестами, и проводятся до начала, в процессе и после окончания лечения в определенные временные интервалы.

1. Нетрепонемные тесты

Наиболее известные из нетрепонемных тестов с визуальной расшифровкой результатов  — это

• RW — реакция Вассермана с липидными антигенами (реакция связывания комплемента с кардиолипиновым антигеном, РСКк) 
• реакция Канна (не используется в настоящее время), 
• цитохолевая реакция Закс-Витебского (не используется в настоящее время), 
• микрореакция преципитации с плазмой или инактивированной сывороткой (МРП или РМП), 
• RPR (тест быстрых плазменных реагинов, Rapid Plasma reagin), 
• TRUST (тест с толуидиновым красным и непрогретой сывороткой, Toluidin Red Unheated Serum Test). 

Среди нетрепонемных тестов имеются 2 теста с микроскопическим считыванием результатов реакции:

1. VDRL — (Venereal Disease Research Laboratory);

2. USR — тест определения активных реагинов плазмы (Unheated Serum Reagins). 

Реактивность в нетрепонемных тестах обычно указывает на повреждение тканей и не всегда специфична в отношении сифилиса. Простота выполнения и низкая стоимость позволяет использовать их как отборочные реакции при установлении предварительного диагноза сифилиса.

2. Трепонемные тесты

В трепонемных тестах используются специфические антигены трепонем. Эти тесты обязательны для подтверждения диагноза (РПГА, РИТ, РИФ и ИФА). Они являются более сложными и дорогостоящими, чем тесты 1-й группы, но и более специфичными и чувствительными. Выявление антител в спинно-мозговой жидкости также производится с помощью трепонемных тестов.

Традиционные трепонемные реакции, подтверждающие диагноз сифилиса, требуют дорогого лабораторного оборудования и опытного персонала, поэтому они редко проводятся вне специализированных лабораторий. Однако сейчас их можно заменить простыми и быстрыми трепонемными реакциями, которые возможно проводить на местах и в которых используется цельная кровь

Проведение этих реакций не требует длительного обучения, специальных условий для хранения реактивов и оборудования. 

Сравнительная дешевизна, удобство и практичность трепонемных экспресс- реакций привлекают к ним внимание не только как к методам подтверждения диагноза. Эти реакции могут применяться для скрининга сифилиса в рамках оказания первичной медицинской помощи (их можно проводить на местах, в том же лечебно-профилактическом учреждении) или в районах, где лаборатории не доступны

Однако поскольку антитела к T. pallidum определяются на протяжении ряда лет независимо от того, лечился больной или нет, трепонемные экспресс-реакции нельзя использовать для оценки эффективности лечения и дифференциальной диагностики нелеченного и излеченного сифилиса.

Описание венерического заболевания

Сифилис сопровождается системным воспалением, которое чередуется обострением и ремиссией. Венерическое заболевание поражает разные системы и органы, повреждая кожный покров, слизистые, кости и суставы, сосуды и нейроны. Возбудителем процесса является бледная трепонема.

К её антигенным соединениям относится кардиолипин. С помощью rw определяются антитела к этому антигену. Бактерия выживает в сложных условиях, поэтому её трудно выявить с помощью микроскопа. Возбудитель попадает в организм после незащищенного полового акта с человеком-носителем. Другие пути заражения:

• контактно-бытовой;
• гемотрансфузионный;
• инъекционный;
• внутриутробный.

Врождённая патология протекает в тяжёлой степени, провоцируя аномальное развитие внутренних органов. В период инкубации заболевание протекает бессимптомно. Через 3 недели после заражения появляется плотная эрозия либо язва.

Внешние признаки начинают проявляться на второй стадии болезни:

• высокая температура тела;
• плохое самочувствие;
• увеличенные лимфоузлы;
• очаговое выпадение волос;
• появление сыпи.

Если своевременно не выявить болезнь, она будет длиться годами. Можно определять патологию с помощью нескольких диагностических методик, в основе которых находятся антитела и ДНК возбудителя в крови пациента. Бледная трепонема выявляется в процессе исследования соскоба, взятого в месте локализации сыпи. Дополнительно нужно сдавать анализ мочи и поражённых органов.

Перспективы

Перспективы, ИГХ, можно объединить в две группы:

• Обнаружение патологии;
• Лекарственная чувствительность.

Диагностические цели таковы:

• Окончательный вариант диагностического анализа;
• Уточнение степени раковой опухоли;
• Дифференцирование образований и процессов, с опухолями не связанными;
• Различение опухолевых процессов, присутствующих в организме.

Некоторые возможности с точки зрения препаратной чувствительности:

• Рецепторы стероидных гормонов;
• Белок Her2/neu;
• Рецепторы соматостатина 2А и 5 типов;
• PD-L1;
• Индекс пролиферативной активности (Ki-67);
• ALK, некоторые иные.

Показания к проведению

Врач может назначить проведение иммуноферментного анализа для диагностики не только сифилиса, но и ряда других инфекционных заболеваний.

Если рассматривать ситуацию непосредственно с заражением трепонемой, поводом для обследования могут стать:

• появление внешних симптомов заболевания (шанкры, сифилитическая сыпь, гуммы и т.д.);
• существенное понижение иммунитета;
• выявление или подозрение на сифилис у полового партнера, близких и членов семьи;
• положительная реакция при проведении других тестов;
• выявление других заболеваний, которые могут быть связаны с сифилисом;
• личное пожелание человека пройти обследование.

ИФА на сифилис назначают при наличии признаков, присущих недугу.

Иммуноферментный анализ назначают также, чтобы подтвердить результаты других обследований, например, домашних экспресс-тестов.

Практическое использование серологических реакций на сифилис

Различные серологические реакции используются для разных практических целей. 

За рубежом при массовых обследованиях населения и при необходимости экстренного выявления сифилиса используются нетрепонемные отборочные реакции (VDRL, RPR и др.). Для постановки диагноза требуется подтверждение в трепонемных тестах РИФ-Абс (FTA-ABS), РПГА или TPPA. В настоящее время, рекомендуется использовать ИФА, как замену VDRL в скрининговых тестах. Это связано с тем, что тест ИФА отличается чувствительностью, специфичностью, возможностью автоматизировать исследования, а также с разработкой диагностических тест-наборов. Кроме того, обосновывается реверсивная схема порядка исследования на сифилис, когда первыми используются трепонемные тесты.

С целью контроля за эффективностью терапии и для оценки активности инфекции рекомендуют VDRL в количественном исполнении. В качестве подтвердающего/дополнительного теста используется тест ИФА на противотрепонемные антитела IgM.

В отечественной практике используют комплекс серологических реакций (КСР), включающий реакцию микропреципитации (РМП) с кардиолипиновым антигеном и РСК с кардиолипиновым и трепонемным антигенами. В последнее время рекомендуется в КСР заменять РСК на ИФА или РПГА. Также используются РИФ (и ее модификации — РИФ-Абс и остальные), РИБТ. 

РИБТ применяют в качестве реакции экспертизы в случаях расхождения трепонемных реакций. 

Подробнее – что могут означать плюсы?

Расшифровка RW состоит из оценки полученных после анализа результатов в плюсах и минусе:

• Четыре плюса (4+, ++++) – полностью отсутствуют признаки гемолиза (комплемент связался с ИК в первой фазе теста), резко положительный результат;
• Три плюса (3+, +++) – тест положительный намечаются слабые признаки гемолиза, который только-только начинается;
• Два плюса (2+, ++) – слабоположительная реакция, гемолиз можно назвать значительным, но пока еще не полным;
• Минус (-) – сыворотка полностью гемолизирована, исследование на сифилис дало отрицательный результат.

Кроме качественного анализа (есть гемолиз или нет?) применяют и количественный вариант метода Вассермана, подвергая сыворотку пациента раститровке в разведениях: от 1:10 до 1:320. Титр АТ оценивается максимальным разведением, которое дает 4+, то есть, резко положительную реакцию.

Следует заметить, что при диагностике отдельных форм сифилиса без количественного исследования не обойтись. Кроме этого, количественное определение необходимо при лечении сифилиса – оно помогает следить за эффективностью проводимых мероприятий. Вместе с тем, всегда нужно помнить, что RW на первых порах не особо замечает внедрение спирохеты в организм, ровно, как и в поздней стадии – перестает замечать:

1. Тест становится положительным лишь спустя полмесяца-месяц (а иногда еще позже) после появления первичной сифиломы (твердого шанкра), то есть, приблизительно через 2 – 3 месяца от момента проникновения Treponema pallidum;
2. Титр АТ также нарастает постепенно, по мере развития инфекционного процесса, достигая максимальных значений (от 1:160 и более) при вторичном свежем сифилисе, проявляющемся генерализованной полиморфной сыпью;
3. Для вторичного рецидивного сифилиса, наоборот, характерно падение титра реагинов, который обычно не переходит границу 1:120;
4. Скрытый и третичный Lues, тем более, не отличается высокими показателями титра (1:20 – 40).

На чем основано исследование

Анализ крови на реакцию Вассермана (RW) основан на том, что при добавлении в кровь зараженного человека Кардиолипина происходит реакция агглютинации. Интенсивность реакции оценивается знаком «+» и положительный показатель может колебаться от одного до 4 плюсов.

Исследование проводится так:

• у пациента берут небольшое количество материала из пальца или из вены;
• добавляют в кровь Кардиолипин;
• оценивают скорость и интенсивность возникшей агглютинации.

Лабораторная диагностика проводится быстро: в экстренных лабораториях результат можно получить в течение часа.

Рекомендуем: Эритроциты в анализе крови повышены: что это значит

Дешевизна и доступность диагностики позволяет своевременно выявлять сифилитические поражения и снизить риск распространения инфекции.

Значение лабораторной диагностики

Зная, что такое реакция Вассермана, становится понятным важность лабораторной диагностики. Проведение анализа позволяет:

• выявить инфицирование бледной трепонемой на ранней стадии;
• определить стадию течения сифилиса;
• провести дифференциальную диагностику (при нейросифилисе или висцеральной форме поражения нет характерных для заболевания признаков);
• проверить эффективность проводимой терапии;
• снять выздоровевших с диспансерного учета;
• выявить заразившихся после контакта с инфицированным человеком.

Суточное мониторирование артериального давления (СМАД)

Помимо суточного мониторирования ЭКГ в амбулаторной практике часто используется суточное мониторирование артериального давления (СМАД).

Этот вид исследования первично назначается пациентам, у которых были выявлены повышенные цифры артериального давления (самостоятельно пациентом или на приеме у врача). Исследование позволяет исключить феномен «белого халата», когда повышение давления происходит только во время приема врача. При СМАД уточняется:

• степень повышения артериального давления в течение суток;
• преимущественное время повышения артериального давления в течение суток;
• скорость утреннего повышения артериального давления;
• зависимость гипертонии от физической активности пациента.

Все эти факторы влияют на прогноз риска развития сердечно-сосудистых осложнений у пациента с гипертонией (инфаркт миокарда, инсульт и др.).

Пациентам, с уже установленным диагнозом и принимающим лекарственные препараты, суточное мониторирование АД назначается для оценки эффективности проводимой терапии.

Исследование проводится в течение 24 часов. Пациенту на руку одевают манжету, сравнимую с манжетой стандартного тонометра, к которой присоединяется регистратор (принцип тот же, что и при мониторировании ЭКГ). Один раз в 15 минут в дневное время и один раз в 30 минут в ночные часы аппарат надувает манжету, проводит измерение артериального давления пациенту и записывает данные на электронный носитель внутри прибора. Пациент так же, как и при мониторировании ЭКГ, ведет дневник жалоб, приема медикаментов и физической активности. По истечении 24 часов врач переносит данные исследования в компьютер, интерпретирует результаты и выдает заключение.

Часто суточное мониторирование ЭКГ и АД проводят одновременно. Существуют современные приборы бифункционального мониторирования ЭКГ и АД, позволяющие вести одновременную запись АД и ЭКГ на один аппарат. В практическом смысле это оправдано тем, что чаще всего у пациентов нарушения деятельности сердца совпадают по времени с патологией артериального давления (например, ишемические приступы на фоне повышения АД).

Исследование СМАД не требует специфической подготовки. Для удобства пациенту рекомендуется приходить на исследование в свободной одежде. Во время мониторирования пациент ведет привычный для себя образ жизни.

В заключении следует отметить, что приведенные методы функциональных исследований являются рутинными, используемыми в амбулаторной практике для первичной диагностики патологии сердечно сосудистой системы. Дальнейшее ведение пациента определяется индивидуально, в соответствии с характером выявленных нарушений.

Консультации и приемы в клинике «Семейный доктор» проводятся по предварительной записи. Мы работаем в выходные и праздничные дни. Запись на прием по телефону контакт-центра +7 (495) 775 75 66, через форму и в регистратуре клиники.

Информацию для Вас подготовила:

Конюхова Мария Юрьевна, терапевт, врач функциональной диагностики. Ведет прием в корпусе клиники на Бауманской.

Источники

• Nawaz Z., Rasool MH., Siddique AB., Zahoor MA., Muzammil S., Shabbir MU., Javaid A., Chaudhry M. Prevalence and risk factors of Syphilis among blood donors of Punjab, Pakistan. // Trop Biomed — 2021 — Vol38 — N1 — p.106-110; PMID:33797532
• Tabatabavakili S., Aleyadeh W., Cerrocchi O., Janssen HLA., Hansen BE., Bogoch II., Feld JJ. Incidence of Hepatitis C Virus Infections Among Users of Human Immunodeficiency Virus Pre-exposure Prophylaxis. // Clin Gastroenterol Hepatol — 2021 — Vol — NNULL — p.; PMID:33737225
• Chan P., Colby DJ., Kroon E., Sacdalan C., Pinyakorn S., Paul R., Robb M., Valcour V., Ananworanich J., Marra C., Spudich S. Clinical and laboratory impact of concomitant syphilis infection during acute HIV. // HIV Med — 2021 — Vol — NNULL — p.; PMID:33728759
• Larscheid G., Schulz T., Herbst H., Trögel T., Eulert S., Pruß A., Schroeter J. Comparison of Total Immunoglobulin G in Ante- and Postmortem Blood Samples from Tissue Donors. // Transfus Med Hemother — 2021 — Vol48 — N1 — p.32-38; PMID:33708050
• Wongjarupong N., Oli S., Sanou M., Djigma F., Kiba Koumare A., Yonli AT., Hassan MA., Mara K., Harmsen WS., Therneau T., Barro O., Vodounhessi G., Sawadogo S., Chamcheu JC., Simpore J., Roberts LR., Nagalo BM. Distribution and Incidence of Blood-Borne Infection among Blood Donors from Regional Transfusion Centers in Burkina Faso: A Comprehensive Study. // Am J Trop Med Hyg — 2021 — Vol — NNULL — p.; PMID:33617474
• Roy A., Das S., Fernandes M., Mohamed A., Chaurasia S. Seropositivity of blood samples of 31,355 cornea donors from a tertiary care network of eye banks. // Int Ophthalmol — 2021 — Vol — NNULL — p.; PMID:33590371
• Maan I., Lawrence DS., Tlhako N., Ramontshonyana K., Mussa A., Wynn A., Marks M., Ramogola-Masire D., Morroni C. Using a dual antibody point-of-care test with visual and digital reads to diagnose syphilis among people living with HIV in Botswana. // Int J STD AIDS — 2021 — Vol32 — N5 — p.453-461; PMID:33570464
• Chu ZX., Shen G., Hu Q., Wang H., Zhang J., Dong W., Jiang Y., Geng W., Shang H., Xu J. The use of inappropriate anal douching tool associates with increased HIV infection among men who have sex with men: a cross-sectional study in Shenyang, China. // BMC Public Health — 2021 — Vol21 — N1 — p.235; PMID:33509136
• Attie A., de Almeida-Neto C., S Witkin S., Derriga J., Nishiya AS., Ferreira JE., Costa NSX., Alves Salles N., Facincani T., Levi JE., Sabino EC., Rocha V., Mendrone-Jr A., Ferreira SC. Detection and analysis of blood donors seropositive for syphilis. // Transfus Med — 2021 — Vol31 — N2 — p.121-128; PMID:33480044
• Davison KL., Reynolds CA., Andrews N., Brailsford SR. Blood donation by men who have sex with men: using evidence to change policy. // Vox Sang — 2021 — Vol116 — N3 — p.260-272; PMID:33400285

ВИЧ

Даже если произошел однократный незащищенный половой контакт с носителем вируса, вероятность заразиться составляет 7-30% для мужчины и 30-60% — для женщины. Интернет пестрит вопросами: когда можно получить самый быстрый ответ о вероятности заражения? Версий множество, бывает даже — «допотопные» 6 месяцев. Вносим ясность.

Самый быстрый, но и самый дорогой анализ, позволяющий с высокой долей вероятности исключить ВИЧ — ПЦР на ВИЧ. Обнаружить РНК вируса в этом случае можно уже на 6-й день после контакта с вероятностью 80%. Но оптимально сделать анализ на 14-й день, тогда его вероятность составит 98%. Классический анализ на ВИЧ — иммуноферментный.

Сегодня применяются тест-системы 4-го поколения, которые определяют не только антитела к обеим разновидностям ВИЧ (ВИЧ1 и ВИЧ2), появляющиеся позднее, но и антиген вируса (р24), который появляется в крови после 14 суток, достигая высоких значений на 28-й день.

Анализ на ВИЧ, сданный на 30-й день после предполагаемого контакта, исключает или подтверждает ВИЧ с вероятностью 99%. Для окончательного успокоения нужно сдать этот анализ повторно через 3 месяца. Ну и чтобы исключить казуистические случаи, коих один на миллион, — еще раз через год.

Ложноположительный результат и его причины

Иногда фиксируется результат других тестов и ИФА ложноположительный на сифилис. Именно поэтому рекомендуется проводить 2 — 3 вспомогательных метода и через некоторое время повторять иммуноферментный анализ.

Подобные неточности встречаются редко, они обусловлены преимущественно такими факторами:

• беременность;
• хронические заболевания;
• недавняя вакцинация;
• травмы.

Ложноположительные результаты разделяют на острые и хронические, в зависимости от характера спровоцировавшего их фактора.

Основные из них представлены в таблице:

Название и фото	Краткое описание
Беременность При беременности могут исказиться результаты ИФА-обследования.	Плод и генетический материал отца расцениваются, как чужеродные агенты .
Острая форма
Инфекция При инфекции, не связанной с венерическими болезнями, реакция ИФА может быть положительной.	Происходит выработка иммуноглобулинов для борьбы с заболеванием.
Травма Иногда у травмированных людей при наличии воспаления, анализы указывают на венерический недуг.	Организм реагирует воспалительным процессом, может произойти сопутствующее инфицирование.
Интоксикация Бывает, что при интоксикации организм пациента дает сбой, и ИФА указывают на наличие трепонемы.	Возникает при отравлении токсическими веществами или проникновении некоторых патогенных микроорганизмов.
Инфаркт Иногда при инфаркте анализы по венерологии могут быть положительны.	Острые проблемы с сердцем создают существенную нагрузку на организм и вызывают ряд десенсибилизирующих реакций.
Вакцинация При вакцинации увеличивается количество иммуноглобулинов, что может спровоцировать положительный результат обследования на сифилис.	Введение вакцины влияет на выработку иммуноглобулинов.
Хроническая форма
Туберкулез При туберкулезе в запущенной форме ИФА может быть положительным.	Подобную реакцию проявляет запущенная форма туберкулеза.
Патологии печени Заболевания печени влияют на работу различных органов, а это иногда приводит к искажению результатов обследований.	Нарушается работа всего организма.
Аутоиммунные заболевания Причиной положительного результата на вензаболевания могут стать аутоиммунные недуги.	При подобных сбоях выработка иммуноглобулинов может быть необоснованной наличием антител.
Болезни соединительной ткани Наследственные болезни соединительных тканей иногда приводят к ложному результату на выявление бледной трепонемы.	Преимущественно являются генетическими патологиями и иногда «сбивают» результаты обследований.
Возрастные изменения При возрастных изменениях могут происходить сбои в работе всех органов и систем, а это может привести к искажению в результатах диагностики.	У пожилых людей иммунная система работает со сбоями, к тому же имеется множество хронических болезней.

При наличии подобных проблем со здоровьем тест на сифилис может показать положительный результат, но это является лишь следствием выработки организмом белков для борьбы с заболеванием. Однако ИФА распознает их, как антигены.

У здорового ребенка до полуторагодовалого возраста могут наблюдаться ложноположительные результаты ИФА, если женщина во время беременности была инфицирована сифилисом. До этого возраста кровь еще не успевает полностью обновиться, поэтому в ней могут присутствовать антитела матери. Исключение составляет ситуация с обнаружением иммуноглобулинов IgM.

Больше информации об особенностях иммуноферментного анализа и методике его проведения вы можете узнать, посмотрев видео в этой статье.